Coloração H&E de seções de tecido embebidas em parafina: uma técnica de coloração diferencial para visualizar seções de tecido hepático usando a combinação de corantes de hematoxilina e eosina

Comece a coloração de hematoxilina e eosina pegando uma lâmina de vidro contendo a seção de tecido embebida em parafina. Mergulhe a lâmina em uma solução de desparafinização contendo xileno - um solvente orgânico que dissolve a camada de parafina ao redor do tecido, tornando-o acessível às manchas nas etapas subsequentes.

Trate a seção de tecido com álcool absoluto para remover o xileno. Mergulhe o tecido em concentrações decrescentes de álcool. Esta etapa reidrata o tecido substituindo o álcool por água para melhor compatibilidade com corantes solúveis em água.

Manchar o tecido com hematoxilina básica, que em sua forma oxidada se liga ao mordente - um cátion metálico. Este complexo se liga eletrostaticamente aos ácidos nucléicos no genoma, manchando o núcleo de roxo.

Mergulhe a seção corada em uma solução de diferenciação ácida para remover o excesso de hematoxilina do citoplasma, fazendo com que o núcleo de retenção de corante pareça distinto. Trate o tecido com um agente de azulamento alcalino para neutralizar os ácidos livres. Isso regride a cor do corante roxo para azul, realçando os detalhes nucleares.

Mergulhe a lâmina em solução ácida de eosina para corar os componentes básicos da proteína no citoplasma e as fibras do tecido conjuntivo em tons de vermelho a rosa. Trate o tecido com álcool para eliminar o excesso de eosina. Use concentrações crescentes de etanol para desidratar o tecido. Mergulhe a lâmina em xileno para limpar quaisquer reagentes restantes.

Na imagem, as células na seção de tecido mostram núcleos azuis claros e regiões citoplasmáticas rosa.

Desparafinize as lâminas mergulhando-as em xileno 100%, duas vezes, por 15 minutos de cada vez. Em seguida, reidratar as lâminas através de um gradiente de etanol. Para cada solução, mergulhe 8 a 10 vezes, por dois segundos por imersão, até que o líquido escorra limpo das lâminas. Coloque as lâminas em hematoxilina Harris 100% filtrada por quatro minutos.

Após quatro minutos, transfira-os rapidamente de volta para o recipiente com água deionizada. Passe água deionizada no canto traseiro do recipiente mais distante das seções. Esvazie o recipiente periodicamente até que a água não fique mais roxa.

Verifique rapidamente a intensidade da hematoxilina em um microscópio de dissecação usando luzes pescoço de ganso. Retorne as lâminas para 100% de hematoxilina por um minuto, se for necessária uma coloração adicional.

Uma vez obtida a coloração de hematoxilina desejada, mergulhe as lâminas duas vezes em ácido clorídrico a 0,05% e, em seguida, transfira-as imediatamente de volta para o recipiente com água deionizada limpa. Esvazie e encha novamente o recipiente com água duas vezes.

Transfira as lâminas para dois recipientes de etanol a 95% por 30 segundos cada. Coloque as lâminas na solução de eosina Y floxina-B por dois minutos.

Após os dois minutos, transfira as lâminas de volta para o recipiente anterior de etanol a 95% e verifique a intensidade da cor no microscópio de dissecação. Se a coloração não for suficiente, volte à solução de eosina por 30 segundos. Repita conforme necessário.

Quando a coloração da intensidade desejada for obtida, transfira as lâminas para isopropanol 100% por 15 segundos. Substitua por isopropanol 100% novo e coloque as lâminas de volta no isopropanol por mais 15 segundos. Repita este processo para um total de seis lavagens de isopropanol.

Depois de imergir em xileno 100% por três minutos, remova uma lâmina, adicione meio de montagem suficiente para cobrir as seções e, em seguida, mergulhe a lâmina em xileno 100%.

Aplique uma lamínula na lâmina e seque qualquer excesso de meio de montagem em uma toalha de papel até que apenas uma linha fina seja vista. Em seguida, mergulhe um lenço de papel no xileno e limpe a parte de trás da lâmina para remover qualquer meio que tenha pingado.

Coloque a lâmina plana em uma superfície resistente, mas móvel, como um pedaço de papelão, e deixe o xileno evaporar no capô por 10 minutos. Deixe as lâminas em temperatura ambiente durante a noite para permitir que o meio de montagem endureça antes da geração de imagens.