Coloração com azul de metileno para avaliar a formação de colônias metastáticas in vitro: um procedimento de coloração para avaliar a metástase quantificando células cancerígenas colhidas do modelo de camundongo cancerígeno

Durante a metástase do câncer, as células tumorais de um tumor primário viajam pelo sistema circulatório, extravasam para órgãos distantes e estabelecem tumores secundários.

Para avaliar a metástase pulmonar em um modelo de camundongo com câncer de mama que foi injetado com células 4T1, células de câncer de mama altamente metastáticas, prepare uma suspensão celular, incluindo células 4T1, isoladas dos pulmões colhidos. Centrifugue a suspensão e ressuspenda as células em meios contendo 6-tioguanina, 6-TG - um análogo da guanina. Semeie a suspensão celular em uma placa de cultura.

O 6TG entra nas células normais, onde a enzima transferase específica o converte em nucleotídeo 6-TG, um nucleotídeo tóxico. Esses nucleotídeos citotóxicos são incorporados ao DNA, causando danos ao DNA e eliminam seletivamente as células da cultura. As células 4T1 têm capacidade reduzida de formar nucleotídeos tóxicos, facilitando sua sobrevivência e aderência à placa. Dependendo da capacidade proliferativa das células, elas formam colônias.

Trate as células com metanol. O metanol permeabiliza as células e desnatura as proteínas celulares. Incubar as células com azul de metileno.

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