Coloração TTC de fatias de tecido cerebral de rato: um procedimento de coloração para diferenciar tecido viável e necrótico em fatias de tecido após lesão de isquemia-reperfusão

Durante a isquemia cerebral, o fluxo sanguíneo prejudicado para o cérebro reduz o suprimento de oxigênio e nutrientes para o tecido, causando danos cerebrais. Após uma breve isquemia, à medida que o fluxo sanguíneo para o cérebro é restaurado, a reperfusão com aumento do suprimento de oxigênio resulta em superprodução de espécies de íons reativos, levando a danos oxidativos nos tecidos, conhecidos como lesão de isquemia-reperfusão.

Para avaliar o dano cerebral após lesão de isquemia-reperfusão em um modelo de rato, primeiro colha o cérebro do rato. Enxágüe em um tampão gelado para remover detritos e sangue. Corte o cérebro para obter fatias coronais das espessuras desejadas. Transfira cuidadosamente as fatias para uma bandeja contendo tampão - com as superfícies anteriores voltadas para cima - para coloração subsequente.

Adicione uma solução de cloreto de trifenil tetrazólio quente, TTC, um corante redox solúvel em água, sobre as fatias de cérebro. Incube em condições escuras, pois o TTC é sensível à luz. O TTC entra nas células dentro da seção do tecido.

Em células vivas, a enzima succinato desidrogenase mitocondrial ativa na presença de cofatores reduz o TTC, incolor quando oxida