Coloração com vermelho de alizarina: uma técnica para visualizar a mineralização por osteoblastos cultivados

Os osteoblastos são células formadoras de osso que secretam pequenas vesículas em sua matriz extracelular, a MEC. Essas vesículas, chamadas vesículas de matriz, são equipadas com transportadores de membrana e enzimas que permitem a entrada de íons cálcio e fosfato, formando cristais minerais em seu interior. À medida que os cristais se acumulam, eles rompem a membrana da vesícula para formar nódulos mineralizados na MEC, compondo a densidade mineral óssea.

Para visualizar a mineralização, comece com células osteoblásticas em um andaime biocompatível em um meio de crescimento adequado. Os osteoblastos se ligam ao andaime e usam fatores de crescimento do meio para secretar vesículas da matriz que posteriormente formam nódulos mineralizados na MEC.

Aspire o meio de cultura e lave as células para remover quaisquer vestígios de meio. Trate as células com uma solução de formalina, que induz a reticulação da MEC, fixando e preservando a estrutura do tecido. Lave as células para remover qualquer formalina restante.

Em seguida, adicione a solução de coloração de vermelho de alizarina e incube a cultura. As moléculas de corante se ligam ao nódulo mineralizado e se associam ao cálcio, um mine