Coloração de prata de glicosaminoglicanos sulfatados: um método de coloração para visualização de glicosaminoglicanos sulfatados em géis de poliacrilamida

Os glicosaminoglicanos sulfatados, GAGs, são polissacarídeos lineares longos, carregados negativamente, com cadeias unitárias de dissacarídeos repetidas sulfatadas em posições distintas, existindo em comprimentos variados.

Para visualizar GAGs sulfatados isolados de interesse diferindo no comprimento da cadeia em um gel de poliacrilamida após eletroforese, remova cuidadosamente o gel de seu. Enxágue com água deionizada, removendo pedaços de gel presos que podem interferir na coloração.

Trate com uma solução ácida de azul de Alcian. Sob condições ácidas, o azul de Alcian, um corante catiônico polivalente com um átomo de cobre no centro, interage especificamente com GAGs sulfatados carregados negativamente por meio de interações iônicas, formando um complexo insolúvel em água azul profundo.

Lave o gel com água deionizada e metanol, removendo qualquer mancha residual. Incube o gel com uma solução alcalina de nitrato de prata. Sob condições alcalinas, os GAGs sulfatados ligados ao azul de Alcian fornecem locais para íons de prata carregados positivamente se ligarem e formarem complexos.

Trate o gel em uma solução de revelação contendo formaldeído e ácido cítrico. O ácido cítrico reduz