Coloração de Giemsa para Ensaio de Formação de Colônias: Um Procedimento de Coloração In Vitro para Avaliar a Capacidade Proliferativa de Células-Tronco Mesenquimais

Os ensaios de formação de colônias medem a capacidade proliferativa das células de se transformarem em colônias.

Primeiro, a suspensão de células derivadas da medula óssea compreende eritrócitos e células mononucleares, incluindo células-tronco mesenquimais ou MSCs, em meio em uma placa de cultura e incubada. As CTMs aderem ao fundo da placa enquanto os eritrócitos e as células mononucleares permanecem em suspensão e são descartados.

Adicione meios frescos contendo fatores de crescimento para apoiar a sobrevivência das MSC. Dependendo de seu potencial proliferativo individual, as MSCs se replicam para formar colônias.

Em seguida, trate as colônias com metanol. O metanol permeabiliza as células, desloca a água do ambiente intracelular e desnatura as proteínas, preservando a arquitetura celular.

Incube as colônias fixas com solução de coloração Giemsa - uma mistura de produtos de oxidação de azul de metileno, principalmente azul B, um corante básico, e eosina Y, um corante ácido. Após a difusão nas células, os dímeros B azuis carregados positivamente se ligam via intercalação ao DNA carregado negativamente no núcleo, conferindo uma coloração azul.

Os monômeros de eosina Y carregados