Método de coloração dupla: uma técnica para visualizar as interações planta-fungo usando vermelho de rutênio e lactofenol azul de algodão

Na ferrugem do café, os esporos de Hemileia vastatrix - um fungo patogênico - pousam na superfície da planta e desenvolvem um tubo de germinação, iniciando assim uma infecção através das hifas.

Essas hifas se espalham dentro do tecido e invadem as células vegetais por meio de estruturas especializadas semelhantes a dedos chamadas haustórios, que absorvem os nutrientes da planta. Os haustórios também secretam moléculas efetoras que são reconhecidas pelas proteínas de resistência da planta, levando ao encapsulamento rico em pectina dos haustórios para restringir a infecção.

Para visualizar essa interação, comece com uma seção de folha de café infectada ultrafina, embebida em resina. Agora, trate a amostra com lactofenol azul de algodão - uma coloração histológica composta por fenol, ácido lático, glicerol e azul de algodão. Aqueça a lâmina brevemente.

À medida que os componentes do corante penetram no tecido, o fenol elimina quaisquer organismos vivos, enquanto o ácido lático e o glicerol ajudam a preservar a arquitetura celular. Simultaneamente, as moléculas de algodão azul se ligam às porções de quitina na parede celular do fungo e a mancham de azul.

Lave a amostra com água destila