Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Técnicas Biológicas
0 visualizações • 2:30 min. • July 8th, 2025
Nas plantas, a lignina - um biopolímero complexo - é normalmente depositada nas paredes celulares dos tecidos para fornecer suporte.
A lignificação é predominantemente encontrada nos espessamentos secundários da parede celular das células do xilema condutoras de água, como vasos e fibras, e nas células extra-xilares, como fibras interfasciculares.
Estruturalmente, a lignina é composta por precursores de monolignol reticulados. Esses álcoois aromáticos polimerizam, formando uma estrutura altamente ramificada. Esse recurso aumenta a resistência e a rigidez da planta.
Para visualizar a deposição de lignina usando a coloração de Wiesner, pegue seções transversais do caule da dicotiledônea embebidas em agarose derivadas da porção média ou inferior da planta. Adicione-os a um tubo de microcentrífuga contendo um tampão adequado.
Adicione a solução de coloração preparada, que contém o floroglucinol acidificado e o etanol, às seções do caule. Os álcoois presentes na lignina reagem com o floroglucinol e o etanol para produzir um pigmento rosa. Isso resulta no desenvolvimento de coloração rosa correspondente à deposição de lignina nas paredes celulares de células especializadas.
Agora, transfira a seção manchada para uma lâmina microscópica. Coloque delicadamente uma lamínula sobre a seção, evitando bolhas, para ajudar a visualizá-la melhor. Visualize as seções sob um microscópio de luz.
A coloração rosada nas células especializadas do xilema e as fibras interfasciculares nas seções transversais do caule confirmam a presença de lignina nesses tecidos.
Para a coloração com floroglucinol, transfira as seções da haste para um tubo de microcentrífuga. Adicione 1 mililitro da solução de floroglucinol ao tubo e tampe imediatamente porque o ácido clorídrico na coloração com floroglucinol é altamente corrosivo. Mova suavemente o tubo para garantir que todas as seções estejam manchadas. Pipete suavemente as seções em uma ponta de pipeta cortada e em uma lâmina de microscópio. Cubra as seções com uma lamínula. Observe as seções sob iluminação de campo claro. A solução seca em 5 a 10 minutos, causando uma deterioração dos espécimes, portanto, a imagem deve ser concluída dentro desse período de tempo.