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Técnicas Biológicas
0 vistas • 2:37 min • July 8th, 2025
Nas células vegetais, a parede celular, uma camada protetora especializada, envolve a membrana plasmática. A parede celular é predominantemente composta de celulose, um polissacarídeo linear e não ramificado de monômeros de glicose ligados de ponta a ponta por meio de ligações glicosídicas β-1, 4.
A celulose existe em um estado agregado na forma de microfibrilas de celulose dispostas ortogonalmente, embutidas em uma matriz de hemicelulose, pectina e proteína.
Certas células, como as do tecido do xilema vascular e das fibras interfasciculares, também incluem lignina, um agente endurecedor, em suas paredes celulares.
Para visualizar a deposição de celulose nas paredes celulares das plantas, comece com seções transversais embebidas em agarose de um caule de planta dicotiledônea em tampão. Adicione uma solução aquosa de calcofluor white, um corante quimiofluorescente e planar. Incube para permitir que o corante se difunda no tecido.
Uma vez dentro, o branco de calcofluor por meio de seus grupos funcionais hidroxila interage e forma ligações de hidrogênio com grupos hidroxila de monômeros de glicose na celulose. Isso aproxima o corante da celulose e favorece interações adicionais de van der Waals, levando a um complexo de corante-celulose estável.
Transfira as seções da haste para uma lâmina de vidro e monte uma lamínula. Sob iluminação de luz ultravioleta, as moléculas de corante ligadas à celulose fluorescem em branco brilhante.
As células da epiderme, córtex e medula exibem intensa fluorescência, com contornos de parede celular claramente demarcados, devido ao alto teor de celulose. Em comparação, as células do xilema e das fibras interfasciculares fluorescem fracamente, possivelmente sugerindo difusão inadequada do corante devido à presença de lignina.
Para coloração branca de calcofluor, transfira as seções do caule para um tubo de microcentrífuga e adicione um mililitro da solução branca de calcofluor a 0,02%. Pipete suavemente a solução para cima e para baixo. Prossiga para incubar e lavar as seções conforme detalhado no protocolo de texto antes de observar as seções sob luz ultravioleta.