Eletroforese em gel de poliacrilamida de dodecil sulfato de sódio para análise de proteínas: uma técnica para separar e visualizar proteínas com base no peso molecular

Comece tratando a amostra de proteína com um tampão desnaturante composto por um detergente - dodecil sulfato de sódio, SDS e um agente redutor - beta-mercaptoetanol. Aqueça-o brevemente. Durante esta etapa, o beta-mercaptoetanol interrompe as ligações dissulfeto, tornando uma conformação desdobrada à proteína.

As proteínas desdobradas com seus aminoácidos hidrofóbicos expostos se ligam ao SDS carregado negativamente e adquirem uma carga negativa uniforme. Adicione um corante de rastreamento adequado à amostra para visualização em tempo real.

Agora, carregue a amostra e o marcador de tamanho molecular padrão em poços separados presentes no gel de empilhamento - a camada superior do gel de poliacrilamida contendo uma concentração mais baixa de polímeros de acrilamida reticulada.

Conecte o aparelho de gel cheio de tampão à fonte de alimentação.

Na presença de um campo elétrico, as proteínas carregadas negativamente migram livremente em direção ao ânodo e se empilham para entrar no gel de resolução - a camada inferior contendo um gel de concentração mais alta.

No gel de resolução, as proteínas começam a migrar de acordo com seu tamanho molecular, com proteínas menores migrando rapidam