Eletroforese alcalina em gel de célula única: uma técnica sensível para estimativa quantitativa de danos ao DNA em células cancerígenas individuais após quimioterapia

Os agentes quimioterápicos induzem quebras de DNA de fita simples e dupla nas células cancerígenas, causando danos ao DNA e morte celular.

Para quantificar os danos ao DNA, misture as células cancerígenas tratadas com quimioterapia com agarose derretida de baixo ponto de fusão. Pipete esta mistura em lâminas de vidro pré-revestidas com agarose. Deixe a agarose derretida solidificar, incorporando as células dentro da matriz de gel poroso.

Trate com um tampão de lise contendo altas concentrações de detergentes e sais. Os detergentes solubilizam as membranas celulares e nucleares. Além disso, o alto teor de sal retira as proteínas histonas do DNA, deixando o DNA superenrolado ligado à matriz nuclear.

Incubar em tampão de eletroforese alcalina. O ambiente alcalino faz com que as superbobinas de DNA se desenrolem, expondo quebras de DNA de fita simples e fita dupla.

Coloque as lâminas em uma bandeja de gel contendo tampão de eletroforese. Inicie a eletroforese.

Sendo carregado negativamente, o DNA é atraído para o ânodo positivo. Os fragmentos de DNA danificados migram para fora do núcleo e viajam através da matriz de gel porosa, com fragmentos de comprimento mais longo movendo-se mais