Ensaio de Bicamada Lipídica Esférica Suportada: Uma Técnica para Observar a Montagem de Septina em Microesferas

As septinas são proteínas-chave do citoesqueleto que se ligam às superfícies curvas da membrana plasmática.

Para observar in vitro a montagem de septinas em microesferas, primeiro, pegue uma suspensão de esferas de sílica microscópicas de tamanho uniforme, atuando como suporte sólido para a formação de bicamadas. Vortex esta suspensão para quebrar quaisquer aglomerados de contas.

Complemente-o com pequenas vesículas unilamelares, SUVs - vesículas esféricas cercadas por uma única bicamada lipídica. Incubar com agitação constante, evitando que as microesferas se assentem.

Durante a incubação, os grupos de cabeça polar externa facilitam a adsorção de SUVs na superfície da microesfera hidrofílica. Essa interação faz com que os SUVs se rompam, seguidos pela fusão de lipídios SUV na superfície curva da microesfera como uma camada contínua, resultando em uma bicamada lipídica esférica suportada, SLB, formação.

Lave para remover o excesso de lipídios não ligados e ressuspenda no tampão de reação. Transfira a suspensão esférica SLB para uma pequena região de uma superfície revestida de polietilenoglicol, para evitar adsorções inespecíficas. Adicione uma suspensão de septina marcada com fluo