Triagem enzimática à base de biomassa cromogênica insolúvel: um ensaio para avaliar a atividade de degradação de enzimas degradadoras de biomassa vegetal

A biomassa é uma matéria orgânica derivada de plantas composta principalmente de polissacarídeos complexos. As enzimas degradadoras de carboidratos atuam sobre esses polissacarídeos para produzir oligossacarídeos menores.

Para avaliar a atividade de degradação de uma enzima, comece tomando diferentes substratos de biomassa cromogênica insolúvel - ICB presentes nos poços de uma placa de reação porosa. Esses substratos são obtidos a partir do tingimento de materiais derivados de plantas com um corante clorotriazina de cor específica. A biomassa resultante tem polissacarídeos complexos marcados com corante que servem como substrato para a atividade enzimática.

Agora, adicione uma solução tampão contendo enzima hidrolisadora de carboidratos. O tampão mantém o pH para uma atividade enzimática ideal. Coloque a placa de reação em um shaker e incuba. A agitação constante permite que as moléculas enzimáticas atinjam o polissacarídeo alvo no substrato ICB.

Durante a incubação, a enzima hidrolisadora cliva as ligações glicosídicas covalentes dentro dos polissacarídeos de cadeia longa. A reação produz oligossacarídeos solúveis ligados a moléculas de corante, que permanecem na solução.

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