Ensaio de persistência in vitro: um método para avaliar o efeito de osmólitos na persistência bacteriana

Na exposição a condições ambientais prejudiciais, um subconjunto de bactérias entra em um estado de baixa atividade metabólica, evitando os efeitos prejudiciais. Essas bactérias, chamadas persistentes, podem tolerar a exposição transitória a altas concentrações de antibióticos.

Para estudar o efeito dos osmólitos - pequenos solutos orgânicos - na persistência bacteriana, primeiramente, obtém-se uma cultura de células bacterianas de fase exponencial com persistentes pré-existentes abaixo do limite de detecção, suspensos em meio.

Em seguida, transfira a suspensão para poços contendo osmólito de uma placa de microarray. Mantenha um conjunto de poços sem osmólito como controle. Sele a placa com uma membrana permeável a gás para permitir a rápida difusão do gás para o crescimento celular e incubação.

Os osmólitos no meio em concentrações apropriadas induzem estresse osmótico, fazendo com que algumas células reprogramem seu metabolismo celular de crescimento rápido para lento, formando persistentes.

Agora, transfira as células tratadas com osmólito e controle para uma placa de ensaio persistente contendo antibióticos. Selar a placa de ensaio do persistente e incubar.

Na presença de antib