Ensaio de imunoabsorção enzimática para verificar conjugados anticorpo-antígeno quimicamente acoplados
Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Técnicas Biológicas
0 visualizações • 2:57 min. • July 8th, 2025
Para provocar uma resposta imune, os antígenos se ligam aos anticorpos específicos para os receptores endocíticos presentes na superfície das células dendríticas, ou DCs - as células apresentadoras de antígenos - que ajudam na captação de antígenos.
A formação de um complexo anticorpo-antígeno é uma etapa crucial e pode ser realizada in vitro acoplando quimicamente o antígeno a um anticorpo monoclonal direcionado a DC.
Para verificar a eficiência do processo de conjugação, comece com uma placa ELISA pré-revestida com os anticorpos capturados. Tratar a placa com uma solução de bloqueio para evitar a ligação não específica dos antigénios à superfície revestida.
Adicione conjugados anticorpo-antígeno quimicamente reticulados à placa e incuba. O epítopo específico do antígeno interage com o parátopo do anticorpo capturado formando um complexo anticorpo-antígeno-anticorpo.
Em seguida, cubra a placa com um terceiro conjunto de anticorpos ligados a uma enzima. Esses anticorpos se ligam especificamente aos anticorpos primários presentes no conjugado, permitindo sua detecção.
Adicione um tampão contendo o substrato cromogênico para visualizar os conjugados. A enzima ligada ao anticorpo reag
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