Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Técnicas Biológicas
0 visualizações • 4:43 min. • July 8th, 2025
Para iniciar o ensaio de biossensor condutimétrico baseado em β-lactamase, pegue um chip transdutor com eletrodos de trabalho, contador e referência. O eletrodo de trabalho possui um revestimento de polímero condutor, facilitando a imobilização do antígeno alvo. Os eletrodos de referência e contador não possuem esse revestimento de polímero.
Adicione uma solução contendo o antígeno alvo no chip. Incubar. O antígeno fica imobilizado na superfície do eletrodo de trabalho por meio de interações não covalentes. Lave para remover antígenos não ligados.
Adicione uma solução de bloqueio. As proteínas da solução se ligam a locais não ligados no eletrodo de trabalho e os bloqueiam.
Adicione uma proteína quimérica bifuncional ao chip para detectar o antígeno imobilizado. A proteína quimérica compreende uma enzima β-lactamase - uma proteína bacteriana responsável pela resistência aos antibióticos. A enzima é fundida a um nanocorpo - a região variável N-terminal de anticorpos de domínio único.
Após a incubação, o nanocorpo da proteína se liga ao antígeno alvo imobilizado. Lave para remover proteínas quiméricas não ligadas.
Conecte o chip a um multímetro digital controlado por computador. Adicione uma solução de detecção contendo o antibiótico benzilpenicilina - um substrato para a β-lactamase.
A benzilpenicilina se liga à β-lactamase da proteína quimérica ligada ao antígeno e é hidrolisada - causando a liberação de prótons. Os prótons induzem uma mudança na condutância elétrica do polímero.
Plote a diferença de condutância em tempo real entre o eletrodo de referência e o eletrodo de trabalho com o antígeno alvo imobilizado, confirmando sua interação com a proteína quimérica.
Para iniciar o ensaio de biossensor condutimétrico baseado em β-lactamase, pegue um chip transdutor com eletrodos de trabalho, contador e referência. O eletrodo de trabalho possui um revestimento de polímero condutor, facilitando a imobilização do antígeno alvo. Os eletrodos de referência e contador não possuem esse revestimento de polímero.
Adicione uma solução contendo o antígeno alvo no chip. Incubar. O antígeno fica imobilizado na superfície do eletrodo de trabalho por meio de interações não covalentes. Lave para remover antígenos não ligados.
Adicione uma solução de bloqueio. As proteínas da solução se ligam a locais não ligados no eletrodo de trabalho e os bloqueiam.
Adicione uma proteína quimérica bifuncional ao chip para detectar o antígeno imobilizado. A proteína quimérica compreende uma enzima β-lactamase - uma proteína bacteriana responsável pela resistência aos antibióticos. A enzima é fundida a um nanocorpo - a região variável N-terminal de anticorpos de domínio único.
Após a incubação, o nanocorpo da proteína se liga ao antígeno alvo imobilizado. Lave para remover proteínas quiméricas não ligadas.
Conecte o chip a um multímetro digital controlado por computador. Adicione uma solução de detecção contendo o antibiótico benzilpenicilina - um substrato para a β-lactamase.
A benzilpenicilina se liga à β-lactamase da proteína quimérica ligada ao antígeno e é hidrolisada - causando a liberação de prótons. Os prótons induzem uma mudança na condutância elétrica do polímero.
Plote a diferença de condutância em tempo real entre o eletrodo de referência e o eletrodo de trabalho com o antígeno alvo imobilizado, confirmando sua interação com a proteína quimérica.