Espectroscopia de Flutuação de Fluorescência para Estudar a Homo-Oligomerização de Proteínas

A espectroscopia de flutuação de fluorescência pode determinar o estado de oligomerização das proteínas em uma amostra.

Para começar, pegue uma lâmina com câmara contendo uma solução de monômero de proteína marcada com fluorescência. Coloque a lâmina sob um microscópio confocal. Concentre o feixe de laser em uma pequena parte da amostra - o volume confocal - para excitar os monômeros de proteína.

As moléculas de proteína se difundem para dentro e para fora do volume confocal devido ao movimento browniano. Esse movimento causa mudanças rápidas na intensidade da fluorescência, levando a flutuações na intensidade da fluorescência ao longo do tempo.

Adicione o agente dimerizante - um ligante bivalente que ajuda dois monômeros de proteína a se ligarem e, assim, formar um dímero. Devido à dimerização, dois rótulos fluorescentes se unem para formar uma única partícula, o que aumenta a intensidade de fluorescência por partícula - o brilho molecular.

O aumento do brilho molecular devido à dimerização aumenta a amplitude das flutuações de fluorescência - à medida que dois marcadores fluorescentes entram e saem do volume confocal juntos.

Obtenha imagens do volume confocal ao longo do tempo an