Imagem de molécula única para visualizar a montagem de condensados de proteínas de fusão em cortinas de DNA

Uma proteína de fusão oncogênica quimérica contém o domínio N-terminal de baixa complexidade, LCD, de uma proteína de ligação ao RNA fundida com o domínio de ligação ao DNA, DBD, de uma proteína do fator de transcrição. Essas proteínas formam um condensado de proteína, que recruta RNA polimerase-II e impulsiona a oncogênese.

Para visualizar a montagem de condensados de proteínas por imagem de molécula única, comece com uma célula de fluxo de DNA - uma lâmina de vidro de sílica fundida equipada com portas de injeção de entrada e saída. A superfície da célula de fluxo é revestida com uma bicamada lipídica biotinilada para proteger a superfície e fabricada com uma barreira em zigue-zague.

Conecte-o a um sistema microfluídico. Introduza uma solução de estreptavidina, que se liga ao seu ligante de alta afinidade de ligação, a biotina, na camada lipídica. Injete DNA lambda de fita dupla marcado com biotina, que contém várias repetições de sequências de ligação a proteínas de fusão. A estreptavidina da bicamada lipídica se liga à biotina do DNA e liga o DNA lambda à bicamada.

Lave com um tampão adequado. A força hidrodinâmica de seu fluxo endireita as moléculas de DNA ancoradas, permitind