Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Técnicas Biológicas
0 visualizações • 5:23 min. • July 8th, 2025
Para visualizar proteínas específicas de resposta a danos no DNA em locais de quebra de fita dupla de DNA, DSB, usando microscopia de imunofluorescência, comece com lâminas de microscópio contendo monocamadas de células mononucleares humanas com DSBs. Fixe as células com paraformaldeído.
Trate com detergente não iônico, permeabilizando membranas para acesso a alvos intracelulares. Adicione uma solução de bloqueio contendo proteínas, bloqueando os locais de ligação não específicos das células. Incubar com anticorpos primários que se ligam às proteínas de resposta alvo.
Trate com uma mistura de anticorpos secundários marcada com diferentes fluoróforos para se ligar especificamente aos seus respectivos anticorpos primários ligados às proteínas. Corar o DNA com DAPI. Adicione meio de montagem; Monte a lamínula.
Durante a microscopia de fluorescência, o feixe de luz incidente atinge o filtro de excitação, permitindo a passagem da luz de um comprimento de onda de excitação específico. Ao atingir o espelho dicróico - um divisor de feixe - a luz de excitação reflete seletivamente em direção à lente objetiva, que focaliza a luz na amostra.
A luz de excitação incidente excita os elétrons do
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