A técnica de espectroscopia de dicroísmo circular para estudar as interações DNA-proteína
Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Técnicas Biológicas
0 visualizações • 4:38 min. • July 8th, 2025
As proteínas de remodelação da cromatina dependentes de ATP regulam a expressão gênica na cromatina compactada, alterando a conformação do DNA de maneira dependente de ATP.
Para estudar as interações remodelador da cromatina-DNA usando espectroscopia de dicroísmo circular, ou CD, pegue uma solução de oligonucleotídeos de DNA de fita dupla. Aqueça para desnaturar os oligonucleotídeos e coloque no gelo.
O resfriamento rápido faz com que o DNA se renaturalize enquanto forma estruturas secundárias. A região de transição de fita dupla para fita simples fornece um local de ligação ideal para os remodeladores da cromatina.
Adicione o DNA resfriado a calor em uma cubeta. Adicione um tampão contendo remodelador de cromatina dependente de ATP, ATP e íons de magnésio.
O remodelador se liga ao DNA, seguido pela ligação do ATP complexado com íons de magnésio à proteína - ativando-a. O remodelador ativado hidrolisa o ATP - induzindo uma conformação de alça de haste no DNA.
Passe a luz polarizada circularmente para a esquerda e para a direita - com uma diferença de fase de 90 ° - através da amostra. O DNA opticamente quiral absorve a luz polarizada circularmente esquerda e direita em diferentes e
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