Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Técnicas Biológicas
0 visualizações • 6:47 min. • July 8th, 2025
Comece incubando moléculas de corante repórter Raman com nanopartículas de ouro para os repórteres se ligarem às nanopartículas.
Adicione polietilenoglicol, anticorpos conjugados com PEG específicos para o antígeno alvo. Os anticorpos se ligam covalentemente às nanopartículas por meio da ligação ouro-dissulfeto. Adicione PEGs conjugados com tiol para bloquear os locais de nanopartículas restantes e evitar a agregação de nanopartículas, formando sondas de nanopartículas.
Revestir os alvéolos das placas de imunoensaio com o antigénio alvo. Bloqueie os locais restantes da placa com uma solução contendo proteínas. Adicione as sondas de nanopartículas. Realize a diluição da sonda em série nos poços. Incubar para que os anticorpos nas sondas se liguem aos antígenos, formando complexos.
Use um microscópio Raman para determinar a resposta óptica da sonda. O laser monocromático incidente excita os elétrons da superfície das nanopartículas de ouro e causa sua oscilação, criando um alto campo eletromagnético local na superfície da sonda.
O feixe incidente e os repórteres Raman interagem, causando luz inelástica aprimorada ou dispersão Raman com diferentes comprimentos de onda e frequências de
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