Isolamento de macrófagos do gânglio da raiz dorsal de camundongos usando dissociação mecânica

O gânglio da raiz dorsal, ou DRG, é um aglomerado de corpos celulares neuronais ao longo da medula espinhal que transportam informações sensoriais do sistema nervoso periférico para o central. A lesão de nervos periféricos causa acúmulo de macrófagos no DRG e o desenvolvimento de dor neuropática.

Para isolar macrófagos viáveis usando um método livre de enzimas, pegue o tecido DRG de camundongo recém-dissecado em um homogeneizador cheio de tampão gelado para limitar o estresse celular. Usando um pilão, homogeneizar mecanicamente o tecido para liberar as células.

Filtre através de um filtro de células para remover aglomerados de células e obter uma suspensão unicelular no fluxo. O homogeneizado do tecido contém neurônios e células não neuronais, que incluem macrófagos e mielina flutuante - a bainha isolante dos neurônios.

Adicionar o homogeneizado filtrado a um tubo contendo um meio de gradiente de densidade e centrifugar. Sob força centrífuga, as células viáveis com maior densidade de flutuação se depositam no fundo do tubo para formar um pellet, enquanto a mielina permanece suspensa. Descarte o sobrenadante.

Ressuspenda as células em um tampão contendo anticorpos conjugados com flu