Isolamento magnético de microglia de cérebros de filhotes de camundongos

A microglia - os macrófagos residentes no cérebro - expressa CD11b, uma integrina da superfície celular.

Para isolar a micróglia do cérebro de filhotes de camundongos, pegue fragmentos de cérebro em tubos de dissociação contendo tampão com papaína, uma enzima proteolítica e desoxirribonuclease.

Coloque os tubos em um dissociador mecânico. Durante a execução, o dissociador rompe mecanicamente o tecido.

A papaína digere a matriz extracelular do tecido, liberando células, incluindo a microglia, em suspensão. A desoxirribonuclease degrada o DNA livre em suspensão, evitando o isolamento celular ineficiente.

centrifuga. Complete a dissociação mecânica por pipetagem. Transfira a suspensão através de um filtro de células para remover detritos e aglomerados de células e obter uma população unicelular homogênea.

Incubar com microesferas superparamagnéticas funcionalizadas com anticorpos anti-CD11b. As microesferas se ligam especificamente ao CD11b nas células, incluindo a microglia.

Pós-incubação, centrífuga. Remova o sobrenadante contendo contas não encadernadas. Ressuspenda as células no buffer. Carregue em uma coluna colocada em um separador magnético. A coluna é composta por uma matriz c