Entrega intracisternal de meningococos em modelos de camundongos para induzir meningite meningocócica

Comece com um camundongo adulto contido e esterilize seu abdômen. Injete uma fonte de ferro exógena por via intraperitoneal no abdômen inferior direito, evitando danos acidentais aos órgãos circundantes.

A fonte de ferro injetado entra na circulação sistêmica e viaja para diferentes órgãos para fornecer ferro adequado para a replicação meningocócica.

Coloque o camundongo anestesiado em decúbito ventral, mantendo a coluna vertebral reta, para facilitar o acesso à cisterna magna, uma região específica dentro do líquido cefalorraquidiano, espaço subaracnóideo cheio de LCR entre as camadas média e interna das meninges que circundam o cérebro.

Esterilize a cabeça do mouse. Injete uma suspensão de Neisseria meningitidis ou meningococcus, uma bactéria patogênica gram-negativa, através de um orifício de rebarba occipital na cisterna magna cheia de LCR.

Poucas horas após a injeção, os meningococos se multiplicam no LCR, ocupando o espaço subaracnóideo, que possui mecanismos de defesa ineficientes do hospedeiro.

As bactérias interagem com as células que revestem as camadas das meninges. Essa interação desencadeia uma resposta inflamatória; As células liberam citocinas pró-inflamatórias e as células imunes são recrutadas, levando à inflamação meníngea ou meningite.

Eventualmente, os meningococos também podem entrar na circulação sistêmica e colonizar outros órgãos.

Antes de iniciar o experimento, pese os animais e avalie sua temperatura corporal. Limpe o animal do pescoço para baixo e desinfete o abdômen com etanol a 70%. Aproximadamente duas a três horas antes da infecção, usando uma agulha de calibre 25, injete dextrana de ferro por via intraperitoneal no quadrante inferior direito do abdômen.

Depois de anestesiar o animal, verifique a profundidade da anestesia, confirmando a ausência de resposta à dor ao beliscar o dedo do pé. Depois de colocar o mouse no gabinete de fluxo laminar, posicione-o em decúbito esternal e estique cuidadosamente os membros da coluna cervical para manter a coluna vertebral em posição reta.

Para manter uma suspensão bacteriana consistente, misture-a suavemente antes de colocá-la em uma seringa com uma agulha de calibre 30 de 8 milímetros. Desinfete a cabeça com etanol 70%. Coloque o animal em decúbito lateral, mantenha as orelhas fora do caminho e flexione o pescoço moderadamente.

Certifique-se de que a linha média do pescoço e a cabeça estejam em uma posição perfeitamente paralela ao tampo da mesa. Em seguida, toque as asas do atlas certificando-se de que elas se sobreponham e sinta o recuo natural na linha média, onde é mais provável que a agulha entre no orifício occipital.

Encha uma seringa com uma agulha de calibre 30 de 8 milímetros com a dose bacteriana subletal estabelecida de meningococos ou caldo GC suplementado com dextrana de ferro como controle em um volume total de 10 microlitros. Use a agulha para identificar o ponto de injeção e, em seguida, injete o conteúdo da seringa na cisterna magna de camundongos através de um orifício de Burr occipital.

Elimine a seringa e a agulha em segurança após a injeção. Coloque o animal na gaiola sob um gabinete de fluxo laminar. Aguarde o despertar e a recuperação total do movimento e proceda à sobrevivência do animal nos animais infectados conforme descrito no protocolo.