Um modelo murino de uveíte micobacteriana preparada para estudar uveíte pós-infecciosa

A inflamação ocular crônica, ou uveíte, após uma infecção bacteriana sistêmica, é denominada uveíte pós-infecciosa.

Para gerar um modelo de uveíte pós-infecciosa, pegue um camundongo anestesiado previamente imunizado com Mycobacterium tuberculosis ou Mtb morto pelo calor. Priming - exposição prévia ao imunógeno - gera células T específicas de Mtb circulantes.

Injete o mesmo imunógeno na cavidade vítrea do olho. As micobactérias se difundem pelo humor vítreo, espalhando-se pelo olho. As barreiras oculares-sanguíneas restringem a entrada de células imunológicas no olho - tornando-o um órgão imunoprivilegiado.

As células apresentadoras de antígenos residentes no tecido ou APCs - na região perivascular - encontram o imunógeno difuso. Ao internalizar o imunógeno, as APCs processam o antígeno Mtb e o exibem na superfície por meio do complexo principal de histocompatibilidade ou MHC.

As APCs ativadas também liberam citocinas pró-inflamatórias que causam permeabilidade da barreira da junção endotelial no vaso sanguíneo. Os leucócitos, incluindo neutrófilos e células T específicas para Mtb, extravasam para o espaço perivascular.

As células T específicas do MTB se ligam ao seu antígeno nas APCs e liberam citocinas pró-inflamatórias, que induzem os neutrófilos a produzir espécies reativas de oxigênio, ou ROS, e causam degranulação.

As proteases granulares liberadas e ROS causam degradação do parênquima tecidual e quebra da barreira ocular-sanguínea - exacerbando a inflamação.

O modelo de infecção está pronto para análise downstream.

No dia da injeção, após confirmar a profundidade da anestesia geral, anestesiar a córnea com uma gota de tetracaína a 0,5% e dilatar a pupila com uma gota de fenilefrina a 2,5%. Depois de enxugar o excesso de líquido, adicione uma gota de betadina a 5% na superfície dos olhos e nos cabelos ao redor para diminuir o risco de endoftalmite.

Após dois a três minutos, remova a betadina e cubra o olho com gel de hipromelose a 0,3% para evitar ressecamento sob anestesia e formação de catarata. Em seguida, coloque uma seringa de 10 microlitros com a mistura de antígeno e fluoresceína. Em seguida, coloque o mouse em uma posição de bruços na plataforma e use as barras auriculares direita e esquerda para fixar a cabeça do mouse.

Posicione e oriente o mouse sob o escopo de forma que o aspecto nasal superior do olho direito fique visível. Em seguida, usando uma agulha de calibre 30, desloque os cílios, exponha a esclera e visualize o limbo e o vaso sanguíneo radial.

Em seguida, usando uma agulha estéril de calibre 30, faça um orifício guia na esclera 1 a 2 milímetros posterior ao limbo. Em seguida, insira a agulha de calibre 34 presa ao suporte de injeção no olho através do orifício guia em um ângulo que evite a lente, mas coloque a ponta da agulha na cavidade vítrea.

Usando um controlador de bomba de microseringa, injete cuidadosamente 1 microlitro do extrato de M tuberculosis na cavidade vítrea. Em caso de refluxo consistente, aumente o volume de injeção para 1,5 microlitros para garantir a administração adequada da dose. Confirme a colocação intravítrea visualizando um reflexo esverdeado no olho e, após dez segundos, remova a agulha do olho.