Preparação de amostra de ensaio de citotoxicidade mediada por células natural killer para análise de citometria de fluxo
Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Imunologia
0 visualizações • 2:40 min. • July 8th, 2025
Comece com um pellet celular contendo células natural killer ou NK e células-alvo coradas com fluorescência.
Ressuspender o pellet num meio adequado e incubar.
A célula NK interage por meio de proteínas de adesão de superfície, formando uma sinapse imunológica com a célula-alvo.
Isso inicia a sinalização das células NK, liberando grânulos citotóxicos, contendo perforina e granzimas na sinapse.
A perforina, uma proteína formadora de poros, cria canais na membrana da célula-alvo, permitindo que as granzimas entrem no citoplasma.
Granzyme, uma serina protease, interage com proteínas intracelulares, ativando a via apoptótica na célula-alvo.
Agora, adicione corante fluorescente de iodeto de propídio.
O corante entra nas células mortas através de suas membranas danificadas e se liga ao DNA intercalando-se entre seus pares de bases.
Consequentemente, as células mortas expressam fluorocromo duplo, enquanto as células vivas expressam fluorocromo único.
A amostra está pronta para citometria de fluxo para avaliar a citotoxicidade induzida por células NK, quantificando o número de células-alvo mortas e vivas.
Para preparar uma amostra de ensaio de citotoxicidade, primeiro rotule tubos de 1,5 m
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