Usando hibridização in situ de fluorescência de imuno-RNA para visualizar o SARS-CoV-2

Pegue células Vero infectadas por coronavírus fixas e permeabilizadas - uma linha celular de mamíferos com deficiência de interferon.

Dentro do hospedeiro, o RNA viral está presente como subgenômico ou sgRNAs, moléculas de RNA de comprimento intermediário que codificam proteínas virais específicas sintetizadas por meio de transcrição.

Adicione a reação em cadeia de hibridização ou sondas iniciadoras HCR.

A sonda HCR se liga à sua sequência complementar no RNA alvo.

Introduza sondas de grampo de oligonucleotídeos marcadas com fluorescência, H-1 e H-2.

A sonda iniciadora se liga à sua cauda H1 complementar, linearizando a estrutura do gancho de cabelo.

A sequência H1 exposta se liga à sua cauda H2 complementar.

A sequência H2 à direita continua se ligando a uma cauda H1, amplificando sondas marcadas com fluorescência ao redor da área-alvo e gerando um sinal robusto.

Adicione anticorpos apropriados para visualizar o citoesqueleto da célula hospedeira.

Manchar os núcleos usando DAPI.

Sob um microscópio de fluorescência, as células infectadas por vírus exibem fluorescência vermelha no citoplasma, indicando a presença do RNA alvo.

Depois de fixar e permeabilizar as células, conforme desc