Visualização baseada em microscopia TIRF da formação e fechamento de fagossomos
Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Imunologia
0 visualizações • 4:13 min. • July 8th, 2025
Pegue um prato de fundo de vidro revestido de polímero contendo glóbulos vermelhos opsonizados por IgG ou hemácias aderidas à sua superfície.
Coloque o prato em um microscópio de fluorescência de reflexão interna total stage, mantendo-o em temperatura fisiológica.
Adicione macrófagos contendo peptídeos citoplasmáticos marcados com fluorescência que se ligam à actina polimerizada, facilitando a visualização do citoesqueleto.
Durante a geração de imagens, direcione um feixe de laser em um ângulo superior ao ângulo crítico, causando reflexão interna e geração de ondas evanescentes no ponto de contato.
As ondas evanescentes iluminam seletivamente os fluoróforos na interface vidro-amostra, permitindo a visualização em tempo real da fagocitose.
Os receptores Fc de macrófagos se ligam às hemácias opsonizadas por IgG, causando agrupamento de receptores ao redor da área de contato.
O agrupamento desencadeia vias de sinalização intracelular e ativação de GTPase, impulsionando a polimerização da actina e o recrutamento de dinamina, formando pseudópodes.
Os pseudópodes se estendem ao redor das hemácias, formando uma taça fagocítica.
Eventualmente, as pontas dos pseudópodes se fundem. A dinamin
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