Detecção de contaminação bacteriana usando nanossensores magnetofluorescentes

0 vistas3:08 min • July 8th, 2025

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Comece adicionando nanossensores magnetofluorescentes às amostras bacterianas. Essas nanopartículas contêm anticorpos específicos para bactérias e um corante fluorescente.

Incubar para permitir a interação com bactérias, causando alterações detectáveis nas propriedades magnéticas da solução.

Inclua uma solução de nanossensor de linha de base sem bactérias como controle.

Transfira cada solução para um relaxômetro magnético, onde um campo magnético constante alinha as partículas magnéticas dentro da amostra.

Aplique um breve pulso para interromper o alinhamento temporariamente.

O relaxômetro mede a rapidez com que as partículas retornam ao seu estado original, conhecido como tempo de relaxamento T2.

Nanosensores agrupados em torno de bactérias aumentam o T2 em comparação com o controle, permitindo a quantificação mesmo em baixas concentrações bacterianas.

Por outro lado, concentrações bacterianas mais altas diminuem o agrupamento de nanossensores, afetando os valores de T2.

Para uma quantificação precisa, execute a medição de fluorescência.

Assim, centrifugue para isolar bactérias e nanossensores ligados.

Ressuspenda o pellet para medição de fluorescência.

Após a excitação, os nanossensores fluorescentes emitem luz, auxiliando na medição bacteriana.

Para preparar soluções para leitura na relaxometria magnética, 300 microlitros de PBS são primeiro pipetados em um tubo eppendorf. Em seguida, uma amostra de estoque bacteriano é adicionada, seguida pela adição de nanossensores. A solução é então transferida para um tubo de vidro e um pedaço de parafilme é colocado em cima para evitar a evaporação.

O tubo de vidro é então colocado dentro de um tubo de RMN maior e inserido no relaxômetro magnético. Uma solução de linha de base não contendo bactérias e apenas nanossensor em PBS é usada para obter uma leitura de T2 de linha de base, conforme mostrado. Em seguida, soluções contendo várias concentrações de bactérias são inseridas no relaxômetro magnético para análise, e as mudanças nos valores de T2 são causadas pela ligação entre os nanossensores e as bactérias.

Como mostrado, a presença de apenas uma UFC bacteriana pode ser detectada em minutos usando essa modalidade. No entanto, à medida que a concentração bacteriana aumenta, as leituras de RM são menos quantificáveis, razão pela qual o uso de dados de emissão de fluorescência também equivale a uma quantificação bacteriana precisa. Antes que os dados de fluorescência possam ser coletados, a amostra deve primeiro ser centrifugada.

A solução é transferida do tubo de vidro para um tubo eppendorf e, em seguida, centrifugada. Isso separa as bactérias e os nanossensores ligados a ela dos nanossensores flutuantes em solução. O sobrenadante é descartado e o pellet bacteriano é ressuspenso em PBS. Finalmente, a amostra pode ser analisada por emissão de fluorescência. A força da emissão será relativa à quantidade de nanossensores restantes na solução e, portanto, também à quantidade de bactérias presentes.

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Última atualização: 1 agosto 2026