Análise em tempo real da migração de células T residentes em diferentes regiões tumorais usando microscopia confocal

Comece com uma fatia de tumor de pulmão contendo células T residentes.

As células T migram através do microambiente tumoral e interagem com células tumorais e elementos estromais, desempenhando funções imunológicas.

A composição do microambiente tumoral influencia fortemente o deslocamento e a velocidade das células T.

Adicione anticorpos imunofluorescentes distintos para marcar células T, células tumorais e elementos estromais no microambiente.

Adicione DAPI, que se infiltra nas células com uma membrana plasmática danificada para manchar o núcleo, permitindo a visualização de regiões necróticas dentro do tumor.

Observe a amostra corada em um microscópio confocal.

Usando uma luz de fluorescência adequada, selecione uma região tumoral de interesse contendo células T residentes. Avalie a viabilidade celular avaliando células positivas para DAPI.

Para análise em tempo real, defina intervalos de tempo e tempo total de gravação.

Para capturar imagens de pilha z, comece em uma profundidade abaixo das células T rotuladas e capture imagens em vários intervalos de tempo.

Utilize o software de rastreamento para comparar o comprimento do deslocamento das células T e a velocidade média em dife