Um ensaio baseado em células para avaliar a captação da proteína tau pela microglia
Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Imunologia
0 visualizações • 5:22 min. • July 8th, 2025
Comece com uma placa de fundo plano contendo microglia murina aderida - células fagocíticas no cérebro.
Introduzir um meio isento de soro contendo imunocomplexos. Esses complexos consistem em anticorpos ligados a agregados de proteínas Tau fosforiladas, que são formados durante certas doenças neurodegenerativas.
Os agregados Tau são marcados com um corante fluorescente verde sensível ao pH.
Durante a incubação, esses imunocomplexos interagem com os receptores Fc das células microgliais, facilitando seu engolfamento.
Este endossomo contendo imunocomplexo se funde com um lisossomo, formando um endolisossomo. O ambiente ácido do endolisossomo faz com que as moléculas do corante fiquem fluorescentes.
Lave para remover os imunocomplexos não internalizados.
Trate com solução de tripsina-EDTA para separar as células.
Transfira a suspensão celular para uma placa inferior em U posicionada sobre o gelo para estabilizar o endolisossomo. Pulverize as células e descarte o sobrenadante.
Lave e ressuspenda as células com tampão FACS.
Usando FACS, identifique as células vivas individuais e quantifique a intensidade de fluorescência verde para avaliar a captação de Tau pela microglia.
No primeiro d
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