Uma técnica de imunofluorescência de marcação dupla para visualizar proteínas do hospedeiro e do patógeno em uma célula infectada

Comece com células epiteliais fixas e permeabilizadas infectadas com um parasita patogênico.

Adicione um tampão de bloqueio para evitar a ligação de anticorpos não específicos.

Sobreposição com anticorpos primários policlonais de camundongo, interagindo especificamente com as proteínas do parasita.

Adicione anticorpos secundários marcados com fluoróforo vermelho distante que interagem com anticorpos primários ligados a proteínas parasitas.

Lave para remover anticorpos não ligados. Bloqueie com anticorpos anti-camundongo que se ligam a anticorpos primários, minimizando a reatividade cruzada durante a marcação da proteína hospedeira.

Adicione anticorpos primários monoclonais de camundongo direcionados às ribonucleoproteínas do hospedeiro dentro das células epiteliais.

Sobreposição com uma mistura de anticorpos secundários marcados com fluoróforo verde e faloidina conjugada com fluoróforo vermelho, facilitando a marcação de anticorpos primários ligados à proteína do hospedeiro e actina, respectivamente.

Lave com um tampão. Monte usando um meio contendo coloração de DNA, conferindo uma coloração azul ao núcleo do hospedeiro, núcleo do parasita e cinetoplasto.

Analise as amostras usando