JoVE Encyclopedia of Experiments
Imunologia
0 vistas • 4:06 min • July 8th, 2025
Permita que um camundongo enjaulado consuma água potável misturada com um polissacarídeo sulfatado sintético conhecido por induzir colite, uma doença inflamatória intestinal.
Este polissacarídeo penetra no lúmen intestinal e rompe a barreira epitelial, permitindo que micróbios comensais penetrem no tecido, levando à inflamação.
Os monócitos se infiltram no tecido e se diferenciam em macrófagos.
Injete intravenosamente anticorpos conjugados com fluoróforo na cauda do camundongo.
Os anticorpos atingem o cólon e se ligam à glicoproteína alvo nos macrófagos, marcando as células.
Anestesie o mouse. Raspe o pelo abdominal para minimizar o reflexo e a absorção da luz durante a imagem.
Coloque o mouse em um de exame e insira-o em uma tomografia mediada por fluorescência ou scanner FMT.
Após a excitação, o fluoróforo emite uma fluorescência. Capture as imagens de refletância de fluorescência para reconstruir um mapa tridimensional mostrando a distribuição espacial dos fluoróforos.
Uma intensidade de fluorescência elevada indica um aumento da infiltração de macrófagos.
Para induzir a colite, encha o suprimento de água potável dos camundongos experimentais com 2 gramas de sulfato de sódio dextrano, ou DSS, dissolvido em 100 mililitros de água potável autoclavada, estimando 5 mililitros de água por camundongo por dia. 24 horas antes da varredura, carregue o coquetel de anticorpos de interesse em uma seringa estéril protegida da luz e injete os anticorpos por via intravenosa nas veias da cauda dos animais experimentais.
No dia do experimento, use um barbeador elétrico para raspar o pelo na região abdominal dos animais experimentais para minimizar a reflexão e absorção da luz. Usando um simulador que imita o tecido de espessura e características de absorção definidas, encha o simulador com um volume específico da solução de anticorpo de interesse e meça a fluorescência no dispositivo FMT.
Em seguida, em uma tomografia veterinária mediada por fluorescência ou dispositivo FMT para pequenos animais, clique em Novo estudo e inclua os traçadores relevantes na descrição do estudo, incluindo os parâmetros de imagem e as doses. Criar grupos de estudo de acordo com o desenho do estudo experimental, equipando cada grupo com o número adequado de animais.
Quando o sistema tiver sido calibrado para as construções traçadoras, coloque o primeiro camundongo anestesiado na posição supina em um de exame aquecível a 42 graus Celsius. Insira o no sistema de imagem e selecione a amostra apropriada do grupo de estudo correspondente. Selecione o traçador administrado para garantir que os valores da concentração do traçador sejam calculados corretamente e adquira a imagem de refletância de fluorescência no comprimento de onda apropriado para a varredura.
Clique em Adquirir imagem para contornar o campo de digitalização e confirme se o campo de digitalização aparece como uma sobreposição na imagem de refletância de fluorescência. Ajuste o campo de varredura até que ele envolva a região de interesse, tomando cuidado para evitar ar ou áreas de pêlo restante.
Dependendo do destino da imagem, selecione uma resolução de campo de digitalização para definir o número de pontos de dados da imagem dentro do campo de digitalização. Em seguida, clique em Digitalizar para iniciar a aquisição da imagem no comprimento de onda selecionado. No final do exame, remova o animal do para permitir que ele se recupere totalmente com monitoramento antes de retornar à gaiola. O FMT pode então ser repetido em vários momentos, conforme experimentalmente apropriado.
Este estudo investiga a indução de colite em camundongos utilizando um polissacarídeo sulfatado sintético e examina a infiltração de macrófagos por meio de tomografia mediada por fluorescência (FMT). A metodologia inclui a administração de sulfato de sódio de dextrana e o uso de anticorpos conjugados a fluoróforos para visualizar macrófagos no cólon.
A tomografia por fluorescência (FMT) permite a avaliação quantitativa e não invasiva da inflamação intestinal mediada por macrófagos em modelos murinos, apoiando a validação precoce de alvos na pesquisa da doença inflamatória intestinal. Este fluxo de trabalho de imagem fornece dados espaciais e de intensidade sobre a infiltração de células imunes, contribuindo para a desmistificação mecanicista e maior confiabilidade preditiva na descoberta pré-clínica. A integração da FMT em fluxos de descoberta potencializa a continuidade translacional e a tomada de decisões em portfólios voltados a programas de imunologia.
A imagem baseada em FMT integra-se ao continuum de descoberta a pré-clínico, conectando estudos mecanicistas iniciais e a validação translacional de biomarcadores em modelos de doenças inflamatórias.
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Última atualização: 29 agosto 2026