Uma técnica para cultivar neurônios do hipocampo de camundongos

Pegue um hipocampo de filhote de rato colhido em um buffer.

Corte o hipocampo em fragmentos menores e transfira-os para um tubo cônico.

Lave o lenço com tampão. Depois que os fragmentos se acomodarem, remova o buffer. Agora, adicione tampão fresco e tripsina.

Durante a incubação, a tripsina, uma enzima proteolítica, digere a matriz extracelular do tecido, soltando os neurônios do hipocampo.

Lave o tecido digerido com tampão.

Depois que os fragmentos se acomodarem, remova o buffer. Adicione tampão fresco e pipete o tecido repetidamente para dissociá-lo mecanicamente, obtendo uma suspensão unicelular.

Assim que o tecido não digerido assentar, transfira a suspensão celular para lamínulas revestidas de poli-L-lisina com suportes de cera dentro de uma placa de cultura contendo meio.

As células se ligam às superfícies revestidas de poli-L-lisina por meio de interações eletrostáticas.

Agora, coloque as lamínulas aderidas aos neurônios voltadas para baixo em um prato contendo células gliais corticais ou não neuronais em meio sem soro.

Na cultura, os suportes de cera evitam o contato direto entre neurônios e células gliais, criando um microambiente onde os fatores secretados pelas células g