Gerando uma cultura de neurônios primários de baixa densidade a partir de neurônios embrionários congelados

Comece com um criovial contendo neurônios embrionários criopreservados e coloque-o em um bloco de aquecimento para descongelamento controlado.

Em seguida, transfira os neurônios descongelados para um tubo e dilua-os com um meio neurobasal gota a gota para equilibrar a pressão osmótica e evitar a lise celular.

Isso gera uma suspensão homogênea com neurônios uniformemente dispersos.

Semeie a suspensão neural diluída em uma placa de vários poços revestida com poli-L-lisina contendo um meio neurobasal enriquecido com nutrientes e antibióticos.

Incubar para permitir que a poli-L-lisina carregada positivamente interaja com os neurônios por meio de interações eletrostáticas, facilitando sua adesão.

Abasteça os poços com meios neurobasais frescos.

Incube as células no mesmo meio sob condições úmidas para evitar a evaporação do meio.

Os neurônios embrionários utilizam os nutrientes e crescem desenvolvendo processos neuronais e formando neurônios primários.

O meio neurobasal mantém os neurônios primários que parecem amplamente espaçados, gerando uma cultura primária de baixa densidade com conexões neuronais.

Comece revestindo uma microplaca de 96 poços com 100 microlitros de poli-L-lisina po