Geração e Diferenciação de Neuroesferas Primárias a partir de Células-Tronco Neurais de Peixe-Zebra

Comece com uma placa multipoços contendo um meio de crescimento enriquecido com fatores de crescimento.

Semeie uma suspensão unicelular de células-tronco neurais do peixe-zebra e incuba.

Inicialmente, as células-tronco utilizam os fatores de crescimento e proliferam.

Remova os detritos e adicione o meio fresco para promover a proliferação celular contínua e a agregação espontânea para formar neuroesferas primárias flutuantes.

Em seguida, transfira as neuroesferas para um poço fresco contendo o meio de crescimento.

Incubar nas mesmas condições para induzir uma expansão progressiva das neuroesferas.

Pipete repetidamente para dissociar mecanicamente as neuroesferas em pequenos grupos.

Em seguida, transfira-os para uma matriz extracelular bem revestida, facilitando sua adesão.

Substituir o meio de crescimento por um meio de diferenciação sem factor de crescimento que contenha insulina.

A ausência de fatores de crescimento e a presença de insulina estimulam a diferenciação celular em células gliais e neurônios com projeções neuronais.

Para se preparar para a geração de neuroesferas, encha cada poço de uma placa de 24 poços com 300 microlitros de meio fresco de condição Z. Em seguida, ad