Uma técnica indireta de co-cultura neurônio-astrócitos para estudar as interações neurônio-glia

Comece com uma placa de vários poços contendo uma inserção de membrana permeável revestida com poli-D-lisina.

Adicione o meio de crescimento de astrócitos ao poço e semeie astrócitos, uma célula glial especializada, na inserção.

Incubar para permitir a adesão celular à poli-D-lisina por meio de interações eletrostáticas e formar uma monocamada.

Substitua o meio astrócitos por um meio de cultura de neurônios.

Transfira esta inserção para uma placa de vários poços contendo neurônios embrionários primários de camundongo aderidos sobre uma lamínula revestida de polímero.

Incubar para estabelecer uma co-cultura indireta de neurônio-astrócitos, onde os dois tipos de células são fisicamente separados, mas compartilham o mesmo meio de cultura.

Os astrócitos secretam vários fatores neurotróficos essenciais para a sobrevivência e o crescimento dos neurônios.

Esses fatores migram através do suporte permeável e interagem com os neurônios primários. Isso promove sua diferenciação e forma projeções neuronais.

Essas projeções se alongam e estabelecem conexões sinápticas entre os neurônios, indicando interações neurônio-glial.

Cubra cada inserto com 10 microgramas por mililitro de poli-D-lisina e