Gerando uma cultura neuronal de densidade ultrabaixa usando uma camada alimentadora neuronal de alta densidade

Comece com duas placas de vários poços: uma com um fundo gravado revestido com um polímero e a outra com uma lamínula revestida com polímero.

Semeie uma suspensão de alta densidade dos neurônios embrionários na placa com o fundo gravado. Adicione uma suspensão de neurônios de densidade ultrabaixa à lamínula que contém bem.

Incubar para permitir a ligação neuronal aos polímeros.

Remova a lamínula e coloque-a sobre a cultura de neurônios de alta densidade, permitindo que os neurônios fiquem de frente um para o outro.

A superfície gravada com estruturas elevadas cria um microespaço que separa neurônios de diferentes densidades.

A cultura de alta densidade atua como uma camada alimentadora e secreta o fator de crescimento neural.

Devido ao espaço de difusão confinado, os fatores de crescimento se acumulam ao redor dos neurônios, facilitando seu crescimento e o desenvolvimento de projeções neuronais.

Introduzir um meio neurobasal com arabinosídeo citosina que inibe seletivamente o crescimento das células não neuronais.

Reabasteça regularmente com um meio neurobasal fresco para manter a cultura neuronal.

Neste procedimento, coloque placas de 24 poços com fundos gravados para neurônios de