Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Neurociência
0 visualizações • 2:15 min. • July 8th, 2025
Comece com uma placa multipoços revestida de gelatina contendo células-tronco neurais derivadas de células-tronco embrionárias de camundongo em um meio de diferenciação basal rico em nutrientes.
As células progenitoras utilizam esses nutrientes do meio para manter sua viabilidade.
Incube para permitir a fixação das células à superfície revestida de gelatina e, em seguida, lave para remover as células soltas e os detritos.
Introduza um meio de diferenciação basal suplementado com um agente estabilizador, nutrientes adicionais e fatores de crescimento neural cruciais para a diferenciação celular e, em seguida, incube.
As células progenitoras consomem os nutrientes e fatores de crescimento, iniciando sua diferenciação em neurônios que começam a estender seus processos celulares.
Ao mesmo tempo, o agente estabilizador interage com metabólitos tóxicos e protege os neurônios em desenvolvimento do dano oxidativo, preservando sua viabilidade.
Substitua regularmente o meio para manter os níveis de nutrientes.
Com o tempo, os neurônios amadurecem, desenvolvendo axônios - os processos celulares mais longos.
Além disso, eles também desenvolvem dendritos, os processos celulares mais curtos, confirmando a diferenciação de células-tronco em neurônios.
Semeie cerca de 500.000 derivados de células-tronco embrionárias de camundongos em 2 mililitros de meio de diferenciação basal por poço nas placas revestidas com gelatina a 0,1%. Divida aleatoriamente as derivadas em três grupos para testar três protocolos de diferenciação de fase II. Incube a placa por seis horas. Em seguida, lave as células duas vezes com 2 mililitros de PBS e adicione 2 mililitros de meio de diferenciação basal, N2 B27 meio 1 ou N2 B27 meio 2 a cada poço, dependendo do protocolo. Coloque as placas na incubadora e deixe as células se diferenciarem por mais 10 dias, trocando o meio correspondente a cada dois dias.