Diferenciação de células progenitoras neurais em neurônios

Comece com uma placa multipoços revestida de gelatina contendo células-tronco neurais derivadas de células-tronco embrionárias de camundongo em um meio de diferenciação basal rico em nutrientes.

As células progenitoras utilizam esses nutrientes do meio para manter sua viabilidade.

Incube para permitir a fixação das células à superfície revestida de gelatina e, em seguida, lave para remover as células soltas e os detritos.

Introduza um meio de diferenciação basal suplementado com um agente estabilizador, nutrientes adicionais e fatores de crescimento neural cruciais para a diferenciação celular e, em seguida, incube.

As células progenitoras consomem os nutrientes e fatores de crescimento, iniciando sua diferenciação em neurônios que começam a estender seus processos celulares.

Ao mesmo tempo, o agente estabilizador interage com metabólitos tóxicos e protege os neurônios em desenvolvimento do dano oxidativo, preservando sua viabilidade.

Substitua regularmente o meio para manter os níveis de nutrientes.

Com o tempo, os neurônios amadurecem, desenvolvendo axônios - os processos celulares mais longos.

Além disso, eles também desenvolvem dendritos, os processos celulares mais curtos, confirmando a diferenciação de células-tronco em neurônios.

Semeie cerca de 500.000 derivados de células-tronco embrionárias de camundongos em 2 mililitros de meio de diferenciação basal por poço nas placas revestidas com gelatina a 0,1%. Divida aleatoriamente as derivadas em três grupos para testar três protocolos de diferenciação de fase II. Incube a placa por seis horas. Em seguida, lave as células duas vezes com 2 mililitros de PBS e adicione 2 mililitros de meio de diferenciação basal, N2 B27 meio 1 ou N2 B27 meio 2 a cada poço, dependendo do protocolo. Coloque as placas na incubadora e deixe as células se diferenciarem por mais 10 dias, trocando o meio correspondente a cada dois dias.