Dissociação e cultura de neurônios de amostras de tecido hipocampal

Comece com amostras de tecido hipocampal contendo neurônios e várias células não neuronais.

Adicione uma solução enzimática de protease. A enzima degrada a matriz extracelular do tecido, iniciando a dissociação celular.

Lave com um meio de revestimento para remover as enzimas residuais.

Pipetar o tecido digerido repetidamente para dissociar mecanicamente as células do tecido, formando uma suspensão unicelular.

Centrifugue e remova o sobrenadante. Ressuspenda as células no meio de revestimento.

Semeie as células em uma lamínula revestida com poli-D-lisina em uma placa de vários poços. A lisina aumenta a ligação celular.

Substitua o meio de revestimento por um meio de manutenção de neurônios contendo nutrientes essenciais para a sobrevivência dos neurônios.

Atualize metade do meio com meios de manutenção contendo arabinosilcitosina ou Ara-C.

Ara-C entra nas células e inibe seletivamente o crescimento de células não neuronais, levando à sua morte.

Substitua o meio por um novo meio de manutenção para apoiar a sobrevivência dos neurônios.

Para dissociar os neurônios do hipocampo para cultura, descongele a solução enzimática de protease e pré-aqueça o meio de plaqueamento a 37 graus Cels