Geração de neurônios e células gliais a partir de corpos embrióides derivados de células-tronco pluripotentes induzidas por humanos

Pegue corpos embrióides, ou EBs, derivados de células-tronco pluripotentes induzidas por humanos. Esses EBs são compostos por três camadas germinativas.

Transferir os EB para uma placa de cultura revestida com matriz contendo um meio adequado e incubar.

A matriz permite que os EBs se prendam à placa de cultura.

Os fatores de crescimento e nutrientes no meio facilitam as células ectodérmicas dos EBs a formar agregados neuroepiteliais dispostos em um padrão circular denominado roseta.

Corte os fragmentos de roseta e retire-os do prato.

Colete os fragmentos e gire-os para baixo.

Rejeitar o sobrenadante e ressuspender os fragmentos.

Usando uma pipeta, mova os fragmentos para cima e para baixo para dissociá-los.

Adicione o número desejado de células a uma placa de poço revestida com matriz contendo um meio de diferenciação.

Os componentes do meio de diferenciação facilitam que as células neuroepiteliais se transformem em células neuronais e gliais totalmente funcionais, as células primárias do sistema nervoso.

No segundo dia, aspire a solução de revestimento de matriz padrão de uma placa de 60 mililitros previamente preparada e adicione 5 mililitros de meio de indução neuroepitelial com