Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Neurociência
0 visualizações • 4:48 min. • July 8th, 2025
Comece com fragmentos de tecido do tronco cerebral contendo glioma pontino intrínseco difuso, um tumor derivado de células progenitoras gliais em um ambiente rico em nervos mielinizados.
Trate com enzimas proteolíticas para degradar a matriz extracelular do tecido.
Após a incubação, pipetar repetidamente o conteúdo para facilitar a dissociação celular e a degradação da bainha de mielina.
Filtrar e centrifugar para recolher as células. Remova o sobrenadante e ressuspenda-o em um tampão frio.
Adicione uma solução de sacarose para separação do gradiente de densidade e misture bem.
Em seguida, centrifugue para separar as células mais pesadas dos detritos de mielina mais leves.
Remova a camada de mielina e adicione um tampão de lise de hemácias.
Adicione um tampão frio para interromper a ação de lise. Centrifugue e remova o sobrenadante para eliminar as hemácias lisadas.
Ressuspender as células num meio neurobasal quente e cultivá-las num balão não revestido.
A ausência de fatores neurotrópicos causa a morte neuronal, enquanto as células progenitoras gliais utilizam nutrientes e fatores de crescimento, levando à proliferação. Adicione meio fresco para manter os níveis de fator de cresci
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