Uma técnica para gerar organoides cerebrais a partir de células-tronco embrionárias humanas

Pegue colônias de células-tronco embrionárias humanas, ou hESCs, cultivadas em uma matriz de suporte.

Aspire o meio e adicione enzimas que degradam a matriz.

Lave para remover as enzimas. Em seguida, adicione um meio e uma pipeta para desalojar as colônias soltas, quebrando-as em cachos menores.

Transfira os cachos para um meio fresco e incuba, permitindo que os cachos formem agregados esféricos.

Deixe as esferas assentarem e remova todas as células mortas.

Incubar com um meio contendo fator de crescimento básico de fibroblastos, ou bFGF, para proliferação celular.

Reabasteça com meios contendo concentrações gradualmente decrescentes de bFGF para facilitar a diferenciação celular.

Introduzir um meio de indução neural, promovendo a diferenciação de hESC em células-tronco neurais ou NSCs, transformando as esferas em organoides exibindo uma estrutura neural semelhante a uma roseta.

Adicione antibióticos para evitar o crescimento de micróbios contaminantes durante a cultura prolongada.

As NSCs se diferenciam em neurônios e glia, desenvolvendo progressivamente os organoides em uma estrutura complexa semelhante a um córtex cerebral.

Dilua a solução estoque de protease até uma concentraçã