Gerando neurônios piramidais corticais a partir de células-tronco neurais humanas

Em uma placa de cultura, cubra uma lamínula com poliornitina, um polímero carregado positivamente, e incuba.

A poliornitina forma uma camada semelhante a uma malha que ajuda as células carregadas negativamente a aderirem à lamínula.

Remova a solução e lave as lamínulas com uma solução salina tamponada para remover a poliornitina não ligada.

Adicione uma solução contendo uma proteína da matriz extracelular chamada laminina e incuba.

A laminina forma uma matriz sobre a lamínula revestida com poliornitina, aumentando a fixação celular.

Descarte a solução e pegue um pequeno número de células-tronco neurais suspensas em um meio livre de fator de crescimento.

Adicione esta cultura de baixa densidade sobre a lamínula preparada em um movimento de rotação lenta para distribuir uniformemente as células.

Inicialmente, a privação do fator de crescimento promove a divisão celular.

Com o tempo, as células-tronco se diferenciam em neurônios com longas projeções

Eventualmente, os neurônios produzem estruturas semelhantes à coluna vertebral sobre suas projeções, como os neurônios piramidais corticais.

Para preparar culturas neuronais, coloque lamínulas de vidro em placas de cultura de seis poços e