Isolando e cultivando pericitos cerebrais de camundongos
Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Neurociência
0 visualizações • 5:43 min. • July 8th, 2025
Adicione tampão ao tecido cerebral do camundongo e homogeneize-o para liberar células e microvasos.
Em seguida, adicione a solução de BSA-dextrano ao homogeneizado. Misture e centrifugue para separar os componentes. Descarte o sobrenadante.
Ressuspenda os microvasos em tampão e passe-os por um filtro, removendo os vasos maiores.
Agora, centrifugue o filtrado e remova o sobrenadante. Ressuspenda os microvasos em tampão contendo DNAses.
Adicione enzimas proteolíticas para liberar células endoteliais e pericitos.
DNases degradam o DNA.
Adicione tampão contendo BSA para interromper a atividade enzimática. Centrifugue e descarte o sobrenadante.
Ressuspenda as células no meio e coloque-as em uma placa de vários poços revestida com matriz basal. Incubar, promovendo a adesão celular.
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As células endoteliais formam uma monocamada e suportam o crescimento dos pericitos.
A passagem celular subsequente em meio de pericito em uma placa de vários poços revestida com gelatina promove o crescimento do pericito, eliminando as células endoteliais.
Comece colocando o cérebro de um camundongo C57 preto 6 macho de quatro a seis semanas de idade, livre de patógenos, em um lenç
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