Preparando uma suspensão unicelular de células imunes a partir de tecido cerebral murino

Comece com um cérebro murino com células neurais, não neurais e imunes dentro da matriz extracelular do cérebro ou ECM.

Pique o tecido e ressuspenda-o em um meio de cultura.

Transfira esses fragmentos de tecido para um tubo e trate-os com as enzimas colagenase e DNase-I.

A colagenase digere a MEC, liberando células individuais, enquanto a DNase-I degrada o DNA livre para evitar a aglomeração celular.

Em seguida, adicione EDTA para inativar as enzimas colagenase.

Adicione um meio de cultura. Centrifugue e remova o sobrenadante.

Adicione uma solução de gradiente de densidade e o meio de cultura ao pellet celular, criando uma camada de gradiente de baixa densidade.

Misture e depois subjaza a solução com uma solução de gradiente de alta densidade para estabelecer uma diferença de densidade.

Centrifugue em baixa velocidade para separar as células imunes na interface, com detritos celulares mais leves na parte superior e células neuronais e gliais mais pesadas na parte inferior.

Remova a camada superior, colete as células imunológicas e transfira-as para outro tubo.

Centrifugue e remova o sobrenadante e, em seguida, ressuspenda as células em um meio, formando uma suspensão de célula únic