Isolamento e cultura de neurônios dopaminérgicos embrionários primários do mesencéfalo de camundongos

Pegue o tecido do assoalho do mesencéfalo isolado da região ventral do mesencéfalo de embriões de camundongos.

O tecido é rico em neurônios dopaminérgicos em desenvolvimento, que liberam o neurotransmissor dopamina.

Adicione uma solução enzimática para quebrar a matriz do tecido, soltando assim as células.

Adicione uma solução de soro contendo DNase I e dissocie mecanicamente o tecido digerido para gerar uma suspensão celular. As proteínas séricas inibem as enzimas, enquanto a DNase I degrada o DNA extracelular liberado durante a lise celular, impedindo a aglomeração celular.

Deixe os detritos do tecido assentarem e transfira as células suspensas para um novo tubo.

Centrifugue e remova o sobrenadante e, em seguida, ressuspenda as células em um meio neuronal de dopamina, ou DPM.

Pegue uma microplaca revestida com um substrato de cultura de células no centro dos poços, criando micro-ilhas.

Transfira as células para o meio das micro-ilhas para cultivá-las em alta densidade.

Incubar, permitindo que as células adiram às micro-ilhas.

Encha os poços com DPM e incuba, facilitando o crescimento dos neurônios dopaminérgicos.

Para configurar culturas primárias de mesencéfalo embrionário a par