Diferenciação de Células-Tronco Pluripotentes Induzidas em Células Progenitoras Neurais

Pegue uma microplaca contendo uma cultura aderente de fibroblastos embrionários de camundongo, ou MEFs, em um meio.

Os MEFs aderidos funcionam como uma camada alimentadora, fornecendo um microambiente de cultura celular de suporte.

Remova o meio e introduza células-tronco pluripotentes induzidas por humanos, ou hiPSCs, em um meio hiPSC suplementado com pequenas moléculas que aumentam a sobrevivência celular.

Incube para permitir que os hiPSCs adiram à camada alimentadora, que secreta fatores de crescimento que facilitam a proliferação de hiPSCs.

Remova o meio e adicione uma solução enzimática para separar as células. Transferir as células e centrifugá-las, retirar o sobrenadante e ressuspendê-las no meio hiPSC.

Transfira as células para uma placa revestida de biopolímero. Incubar para permitir que os MEFs adiram.

Transfira os hiPSCs suspensos para uma microplaca de fundo em V. Centrifugue as células e incuba-as, induzindo a formação de agregados celulares.

Reabasteça com um meio de diferenciação. Os nutrientes do meio e as interações célula-célula dentro do agregado facilitam a diferenciação de hiPSC em células progenitoras neurais.

Para este protocolo, comece estabelecendo células