Estabelecendo uma configuração de célula inteira por meio do método Patch Clamp

0 vistas3:12 min • July 8th, 2025

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Comece com uma fatia de cérebro de camundongo imobilizado colocada em uma câmara de gravação da configuração eletrofisiológica preenchida com um líquido cefalorraquidiano artificial para manter a viabilidade neuronal.

A configuração contém uma micropipeta de gravação preenchida com solução catiônica pré-montada conectada a um amplificador e uma unidade de controle de pressão.

Sob um microscópio, localize um neurônio e posicione a micropipeta perto dele.

Aplique pressão de ar positiva para limpar quaisquer detritos.

Mova a micropipeta em direção ao neurônio até que uma covinha se forme na membrana, indicando proximidade neuronal.

Aplique sucção fraca para puxar um pequeno adesivo de membrana dentro da micropipeta.

Isso cria uma vedação hermética que aumenta a resistência da micropipeta, confirmando uma vedação estável.

Manter o potencial da célula em um potencial fisiológico de repouso para estabilidade celular.

Em seguida, aplique uma sucção breve e forte para romper a membrana do remendo, estabelecendo uma conexão direta com o interior da célula.

Essa configuração de célula inteira está pronta para registrar a atividade elétrica neuronal.

Usando a roda de foco fino do microscópio, comece a focar enquanto abaixa a micropipeta gradualmente. Sempre foque primeiro e, em seguida, abaixe a micropipeta até o plano de foco para garantir que a ponta da micropipeta não penetre abruptamente na fatia. Quando a micropipeta entrar em contato com a superfície da fatia, diminua a velocidade do micromanipulador para o modo médio-baixo. Aplique suavemente uma leve pressão positiva para limpar quaisquer detritos no caminho.

Em seguida, aproxime-se da célula, alternando com os botões de controle X, Y, Z ou aproximando-se diagonalmente onde ambos os eixos XZ são alterados com a rotação do botão do eixo Z. Quando a micropipeta estiver perto o suficiente da célula, uma covinha aparecerá na superfície da célula.

Agora, aplique uma sucção fraca e breve através do tubo que está conectado ao tubo de sucção do porta-pipetas para criar uma vedação. Enquanto um gigaseal está se formando, use o comandante do amplificador controlado por computador para trazer o potencial de retenção das células para o potencial fisiológico de repouso, a fim de evitar mudanças repentinas quando a membrana for rompida. Após a formação do gigaseal, compense a capacitância rápida ou lenta.

Aqui é muito importante que a sucção aplicada não seja muito forte, caso contrário, a membrana pode se romper antes de estabelecer a vedação.

Se a vedação permanecer estável e acima de 1 giga ohm, aplique uma sucção breve e forte para romper a membrana plasmática.

A sucção deve ser breve e é mais forte do que a pressão aplicada ao estabelecer uma vedação para romper adequadamente a membrana e obter uma configuração estável de toda a célula.

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Última atualização: 1 agosto 2026