Analisando a atividade neural em neurônios ganglionares espirais murinos primários usando matrizes de multieletrodos

Comece com uma cultura de neurônios do gânglio espiral em uma matriz de múltiplos eletrodos, ou MEA.

O MEA consiste em registrar eletrodos conectados a contatos por meio de um circuito.

Lave o MEA para remover a mídia e seque os contatos para evitar ruídos induzidos pela umidade durante a gravação.

Monte o MEA em seu suporte e instale-o na configuração de gravação.

Os contatos MEA se alinham com os conectores do suporte que transmitem sinais elétricos para a configuração de gravação.

Adicione uma solução extracelular que imita o ambiente, permitindo a atividade fisiológica normal nos neurônios.

Comece a gravar. Os eletrodos detectam sinais espontâneos ou potenciais de ação gerados pelos neurônios, visualizados como picos na interface do software.

Agora, aplique um pulso elétrico a um eletrodo exibindo atividade espontânea.

O pulso gera um campo elétrico, estimulando os neurônios nos eletrodos vizinhos.

Registre a atividade dependente de estimulação.

Finalmente, adicione uma neurotoxina que bloqueia os canais iônicos dependentes de voltagem, impedindo a geração de potencial de ação.

Grave o sinal para identificar o ruído de fundo.

Após 18 dias coletivos de cultura, lave a cultura MEA com a solução extracelular preparada anteriormente à temperatura ambiente. Em seguida, seque os contatos do chip MEA com um pedaço de tecido e monte os MEAs no suporte MEA. Por fim, instale o MEA na configuração de gravação.

Em seguida, adicione 300 microlitros da solução extracelular e aguarde 10 minutos para permitir que o sistema se estabilize antes de gravar. Agora, registre a atividade espontânea por dois minutos de todos os eletrodos e identifique os eletrodos ativos. Em seguida, identifique os eletrodos que respondem à estimulação.

Para excluir o artefato de estimulação, estimule com o mesmo eletrodo 10 vezes. Se a cultura responder pelo menos oito em cada 10 vezes, pode ser assumida como uma resposta positiva após a estimulação induzida pelo eletrodo. Para identificar o ruído de fundo, aplique TTX à cultura na concentração de um micromolar para bloquear os canais de sódio dependentes de voltagem e, em seguida, registre por dois minutos.